产品货号：
GS0067
中文名称：
柱式细菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称：
Czup Column Bacteria gDNA Purification Kit
产品规格：
50次|100次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒对经典的SDS裂解液进行了改良，并使用高浓度的蛋白变性剂，大大提高了裂解的效率，缩短了裂解的时间。无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。从1mL过夜培养的细菌菌液可以获得10～20μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
| 组分 | 50次 | 100次 |
| Buffer Digestion | 10mL | 20mL |
| Buffer BD | 12mL | 24mL |
| PW Solution (concentrate) | 18mL | 36mL |
| Wash Solution (concentrate) | 7.5mL | 15mL |
| CE Buffer (pH9.0) | 15mL | 30mL |
| Proteinase K | 1.2mL | 2.4mL |
| Enzymatic lysis buffer | 10mL | 20mL |
| 吸附柱及收集管 | 50套 | 100套 |
保存：室温
水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、1.5mL离心管、无水乙醇、异丙醇、RNase A溶液(10mg/mL)、溶菌酶（阳性菌）等。
- 本试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置4℃保存。
- Buffer Digestion中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
- 本剂盒初次开启，按瓶身标签说明在PW Solution中加入相应量的异丙醇混匀、Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀，在瓶身做好标记。于室温密封保存。（18mL PW Solution中加入12mL异丙醇，7.5mL Wash Solution中加入22.5mL无水乙醇；36mL PW Solution中加入24mL异丙醇，15mL Wash Solution中加入45mL无水乙醇。）
- 每次使用前请检查Buffer Digestion是否出现沉淀，如有沉淀，请于56℃溶解后使用。
- 样品处理
- 革兰氏阴性细菌：取0.5～1mL过夜培养的细菌菌液，加入1.5mL离心管中，室温8000rpm离心1min，弃上清，收集菌体。加入180μL Buffer Digestion，再加入20μL Proteinase K溶液，震荡混匀。56℃水浴1h至细胞完全裂解。
注：建议菌液使用量，当OD600值≥3时，菌液使用500μL即可；当OD600值<3时，菌液使用0.5～1mL。 - 革兰氏阳性细菌：取0.5～1mL过夜培养的细菌菌液，加入1.5mL离心管中，室温8000rpm离心1min，弃上清，收集菌体。加入100μL Buffer Digestion和80μL溶菌酶溶液（使用前将相应的溶菌酶加入到Enzymatic lysis buffer中，配置成20mg/mL的溶菌酶溶液）重悬菌液，37℃水浴30min。
注：
① 处理芽孢杆菌，双歧杆菌，微球菌，红球菌，链霉菌等时，采用100μL Buffer Digestion和80μL溶菌酶溶液重悬菌液，37℃水浴30min；处理乳酸菌时，建议采用180μL溶菌酶溶液重悬菌液，37℃水浴30min；处理葡萄球菌时，建议采用100μL Buffer Digestion和80μL溶菌酶，再加入2μL溶葡球菌酶溶液（2mg/mL）重悬菌液，37℃水浴30min。
② 水浴过程中，每10min颠倒混匀一次，可促进样品裂解。
加入20μL Proteinase K溶液，震荡混匀。56℃水浴30min至细胞完全裂解。
注：如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL的RNase A（10mg/mL），室温放置2～5min。
- 革兰氏阴性细菌：取0.5～1mL过夜培养的细菌菌液，加入1.5mL离心管中，室温8000rpm离心1min，弃上清，收集菌体。加入180μL Buffer Digestion，再加入20μL Proteinase K溶液，震荡混匀。56℃水浴1h至细胞完全裂解。
- 加入200μL Buffer BD，充分颠倒混匀，70℃水浴10min。
注：加入Buffer BD后可能会产生白色沉淀，一般70℃水浴后会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 - 加入200μL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
注：加入无水乙醇后可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响DNA的提取和应用。 - 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再12000rpm室温离心1min，倒掉收集管中的废液。
- 将吸附柱放回收集管，加入500μL PW Solution，10000rpm离心30 s倒掉滤液。
注：使用前注意溶液中是否按比例加入异丙醇。 - 将吸附柱放回收集管，加入500μL Wash Solution，10000rpm离心30 s倒掉滤液。
注：使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。 - 将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
注：将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的Wash Solution，Wash Solution的残留会影响基因组DNA的产量和后续的实验。 - 取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50～100μL CE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
注：如果想提高DNA的得率，可重复步骤8。
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